Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
ve0 = m o • e = f h V V ] I h 0 V l 0
eU - диэлектрическая постоянная буферного раствора,
Z - дзета-потенциал поверхности капилляра Скорость вещества (v) определяется как:
v = v + v
ep eo
В зависимости от заряда вещества электрофоретическая подвижность аналита и электроосмотическая подвижность могут быть направлены одинаково или противоположно. В условиях нормального капиллярного электрофореза анионы перемещаются в направлении, противоположном направлению
электроосмотического потока, а их скорости меньше электроосмотической скорости. Катионы мигрируют в направлении, совпадающем с направлением электроосмотического потока, а их скорости превышают электроосмотическую скорость. В условиях, когда электроосмотическая скорость превышает электрофоретическую, катионы и анионы могут быть разделены в течение одного анализа.
Время (t), необходимое веществу для миграции на расстояние (/) от конца капилляра, в который вводится вещество, до точки детекции (эффективная длина капилляра), определяется выражением:
l l x L
vep + veo (mep + meo )V
В общем, при рН более 3 капилляры с немодифицированной поверхностью, изготовленные из плавленого кварца, имеют отрицательный заряд, обусловленный ионизацией силанольных групп, расположенных на внутренней стенке капилляра. Соответственно, электроосмотический поток направлен от анода к катоду. Если необходимо получить хорошую воспроизводимость скорости миграции веществ, электроосмотический поток должен оставаться постоянным. В некоторых случаях требуется уменьшить или устранить электроосмотический поток путём модификации внутренней стенки капилляра или изменения концентрации, состава и/или рН буферного раствора.
После введения исследуемой пробы в капилляр каждый ион аналита, входящего в состав пробы, мигрирует в среде фонового электролита согласно своей электрофоретической подвижности как независимая зона. Дисперсия зоны, представляющая собой расширение полосы каждого вещества, является следствием различных явлений. При идеальных условиях вклад в процесс расширения зоны вещества вносит только молекулярная диффузия вещества вдоль капилляра (продольная диффузия). В этом идеальном случае эффективность зоны, выражаемая как число теоретических тарелок (n), определяется как:
= (m ep ± m eo) • V • l П = 2 • D • L ’
где:
D - коэффициент молекулярной диффузии вещества в буферном растворе.
На практике значительный вклад в дисперсию полосы вносят процессы тепловой конвекции, адсорбции образца на стенках капилляра, а также неодинаковая проводимость между образцом и буферным раствором, длина устройства для ввода пробы, размер ячейки детектора и расположение ёмкостей с буферными растворами на разных уровнях.
Разделение двух полос (выражаемое как разрешение, Rs) может быть достигнуто при изменении электрофоретической подвижности аналитов либо электроосмотической подвижности, а также при увеличении эффективности полосы для каждого аналита, согласно уравнению:
epb m epa )
RS = = 5
4(m ep + meo )
где:
mepa и mepb - электрофоретические подвижности двух разделяемых аналитов, mep - средняя электрофоретическая подвижность двух аналитов
m ep = 2 (mepb + mepa ).
АППАРАТУРА
Прибор для капиллярного электрофореза состоит из:
- управляемого высоковольтного источника постоянного тока;
- двух резервуаров с буферными растворами, расположенных на одном и том же уровне и содержащих предписанные анодный и катодный растворы;
- двух электродов (катода и анода), погружённых в резервуары с буферными растворами и соединённых с источником тока;
- капилляра, в котором проводится разделение (обычно изготовленного из плавленого кварца); при использовании некоторых типов детекторов капилляр имеет оптическое окошко, расположенное на уровне детектора. Концы капилляра помещены в резервуары с буферными растворами. Капилляр заполнен раствором, указанным в частной статье;
- подходящей системы ввода пробы;
- детектора, способного контролировать количество определяемых веществ, проходящих через разделяющий сегмент капилляра в течение определённого времени; детекция обычно основана на абсорбционной спектрофотометрии (в УФ- и видимой областях) или флуориметрии, в ряде случаев может быть использовано также кондуктометрическое, амперометрическое или масс-спектрометрическое детектирование; альтернативным способом детекции веществ, которые не поглощают УФ-излучение и не флуоресцируют, является непрямое детектирование;
- для получения хорошо воспроизводимых результатов разделения рекомендуется использовать термостат, способный поддерживать постоянную температуру внутри капилляра;
